尊龙凯时助力TurboTEV蛋白酶高效蛋白质活性应用

TurboTEV蛋白酶是一种改进版的烟草蚀刻病毒（TEV）N1a蛋白催化片段，作为一种半胱氨酸蛋白酶，它能够有效识别并切割位点Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln-Gly，主要在Gln和Gly之间进行切割。该酶在4°C下展现出极高的活性，具有显著的特异性和稳定性，同时它的活性不依赖于特定的缓冲液，可以在最适合目标蛋白的缓冲条件下使用。

TurboTEV蛋白酶的分子量为52kDa，配有GST和His标签，这使得它可以通过Ni螯合或谷胱甘肽（GSH）树脂与剪切标签方便地去除。根据来源，大肠杆菌中该酶的活性超过10 Units/µg，具体来说，1单位的TurboTEV蛋白酶在30°C下可在1小时内裂解85%的3µg标准底物。

尊龙凯时针对TurboTEV蛋白酶的使用，推荐以下操作方案：

1. 在溶液中进行裂解：
   • A. 准备新鲜的冰冷透析缓冲液，例如：25mM Tris-HCl (pH 8.0), 150-500mM NaCl, 14mM β-巯基乙醇。
   • B. 将目标蛋白样品池稀释至1-2 mg/mL，注意如果目标蛋白在透析缓冲液中聚集，该步骤可以跳过。
   • C. 按照1:100 (w/w)的比例加入TurboTEV蛋白酶，即100mg目标蛋白需配合1000 Units（1mg）TurboTEV蛋白酶。
   • D. 在4°C下用透析缓冲液透析一夜（大约16小时）。
2. 去除TurboTEV蛋白酶：通过上柱的方法进行去除。
3. SDS-PAGE分析（可选）：如有需要，可进行电泳分析。

尊龙凯时提供的TurboTEV蛋白酶在以下领域具有广泛的应用：

• 蛋白裂解功能；
• 从重组蛋白中去除融合标签；
• 蛋白质和肽的纯化。

常见问题解答：

Q1：TEV消化反应的缓冲液条件有多重要？

A：我们建议避免使用1mM DTT、10%甘油、20mM组氨酸、500mM NaCl和100mM Tris，β-巯基乙醇可以作为替代。

Q2：在剪切之前，需要缓冲液交换蛋白质吗？

A：这在某些情况下可能是必要的。

在过去的几年中，尊龙凯时不断致力于为生物研究领域提供优质产品与服务，涵盖免疫学、细胞生物学及分子生物学的各个方面，包括代谢检测试剂盒、ELISA试剂盒、生化试剂、抗生素、核酸酶、蛋白酶及其他科研所需试剂等。